6. 제한효소 (restiction enzyme) 반응

제한효소 (restiction enzyme) 반응

 

1. 실험목적 : DNA를 제한효소로 잘라서 정기영동하여 분석함으로써 제한효소의 특성과 반응을 이해하고 DNA상의 제한효소 지도 (map)를 작성할 수 있는 능력을 기른다.

 

2. 재료, 실험기구 및 기기 :

 

Plasmid DNA, DNA size marker,

제한효소와 reaction buffer, 3차 증류수,

eppendorf tubes, micropipetter (20 ㎕, 200 ㎕),

piptet tips, 37℃ water bath,

ice bucket, ice,

microcentrifuge, microwave,

agarose, flask,

미세 저울, ethidium bromide (10 ㎍/ml stock),

6X DNA loading dye, 50X TAE buffer,

agarose 전기영동 시스템과 power supply,

UV box와 사진촬영 시스템

 

3. 실험 방법 :

DNA를 자르기 위해서는 eppendorf tube에 reaction buffer, DNA 그리고 효소를 같이 넣고 특정온도에서 일정시간동안 반응을 시켜야한다. 먼저 반응을 시키기 전에 자르려고하는 DNA의 양과 reaction volume을 결정해야 한다 (대체적으로 1 ㎕ reaction volume 당 최대 약 100 ng DNA 까지 사용한다). 완전하게 DNA를 자르기 위해서는 효소의 충분한 (3-5배) 활성 단위(unit)로 잘라야한다. 효소 단위